凝膠色譜柱的填料是親水而剛性,多孔球型,化學(xué)和機(jī)械性能都非常優(yōu)異的聚合物。凝膠色譜柱適用于以凝膠色譜的模式分析分離蛋白質(zhì)、多肽、多糖、寡糖、DNA、RNA、水溶性的有機(jī)聚合物和其他水溶性大分子樣品等。
凝膠色譜柱的安裝和使用:
1.在連接色譜柱之前,預(yù)先用即將使用的流動(dòng)相體系置換以前用的流動(dòng)相體系。
2.在連接色譜柱時(shí),要趕走因色譜柱保存不當(dāng)或長(zhǎng)時(shí)間不用在色譜柱的進(jìn)口或者出口處產(chǎn)生的一些氣泡。
3.連接凝膠色譜柱要注意標(biāo)示的色譜柱進(jìn)出口方向。
4.如果分析所用的溫度較高,應(yīng)在較低的流速下比如0.2到0.3ml/min的流速下緩慢地升高溫度,當(dāng)溫度達(dá)到設(shè)定溫度后,再慢慢地增大流速至設(shè)定值。
5.如果色譜柱需要較長(zhǎng)的時(shí)間才能平衡穩(wěn)定,檢查色譜柱連接處是否有漏液。
消除凝膠色譜柱的脫水現(xiàn)象的步驟:
1. 按照相反的流動(dòng)方向?qū)⑸V柱連接到液相系統(tǒng)上;
2. 不要將色譜柱與檢測(cè)器相連;
3. 以推薦zui大流速的一半流速,使用濾過(guò)的20%乙醇超純水溶液進(jìn)行色譜柱的過(guò)柱;注意:反相色譜柱需要使用60%的乙醇。
4. 繼續(xù)重復(fù)上述程序,直到您確信色譜柱已經(jīng)再水化處理完畢。再水化處理可能需要幾個(gè)小時(shí)的時(shí)間,這取決于凝膠色譜柱的尺寸大??;
5. 按照正確的流動(dòng)方向?qū)⑸V柱連接到液相系統(tǒng)上;
6. 如果有機(jī)物不是正常流動(dòng)相的一部分的話,要使用3個(gè)柱體積的超純水沖洗色譜柱以去除有機(jī)物;
7. 使用上樣緩沖液進(jìn)行柱平衡(通常使用3——5個(gè)柱體積);
8. 使用QC 測(cè)試方法評(píng)價(jià)柱子的性能,以確保色譜柱能夠正常使用。
凝膠色譜柱的色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來(lái)的一種快速而又簡(jiǎn)單的分離分析技術(shù),由于設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便,不需要有機(jī)溶劑,對(duì)高分子物質(zhì)有很高的分離效果。