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反向色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在甲醇(或乙腈)/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的活動(dòng)相和甲醇(或乙腈)/水互溶,由于色譜柱在運(yùn)輸過(guò)程中可能會(huì)干掉,因此在用活動(dòng)相分析樣品之前,應(yīng)使用分10-20倍的體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱:假如您所使用的活動(dòng)相中含有緩沖鹽,應(yīng)留意用含水量很高(約95%)的活動(dòng)相過(guò)渡,樣品分析完后,沖洗柱子是亦然。過(guò)往傳統(tǒng)的方法使用純水沖洗,對(duì)于非極性柱,如C8或C18,由于純水不能浸潤(rùn)填料表面而沖倒碳鏈,造成柱效下降。另外,分析樣品時(shí),由于純水在填料表面不能浸潤(rùn)形成水膜,出現(xiàn)樣品不保存而分不開(kāi),重現(xiàn)性差,所以對(duì)于一般的C18或C8,有機(jī)溶劑不能低于5%。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過(guò)出廠測(cè)試后是保存在正庚烷中的。假如該色譜柱需要使用含水或甲醇或乙腈的活動(dòng)相,請(qǐng)?jiān)谑褂没顒?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡。
如何平衡色譜柱:
平衡過(guò)程中,將流速緩慢地進(jìn)步用活動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對(duì)試劑濃度假如較低,則需要較長(zhǎng)的時(shí)間平衡)。
色譜柱的再生
建議用來(lái)沖洗的溶劑體積
色譜柱規(guī)格 柱體積 溶劑體積
150×4.6 2.50ml 50ml
250×4.6 5.0ml 100ml
250×10 20ml 400ml
請(qǐng)根據(jù)下表選擇您的再生方法:
極性固定相(如Si,NH2,Diol色譜填料)的再生:正庚烷—氯仿—乙酸乙酯—丙酮—乙醇—水 非極性固定相(如反向填料C18,C8等)的再生:水—乙腈—氯仿(或異丙醇)—乙腈—水
色譜柱的維護(hù)
1、使用保護(hù)柱
2、大多數(shù)柱的PH穩(wěn)定范圍是2-7.5,盡可能在此范圍內(nèi)使用
3、避免活動(dòng)相組成及極性有劇烈變化
4、活動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過(guò)濾處理
5、假如使用極性或離子性的緩沖溶液作活動(dòng)相,要在實(shí)驗(yàn)完畢將柱子沖洗干凈
6、壓力升高時(shí)更換保護(hù)柱