進口反相色譜柱的選擇性主要為疏水作用、立體選擇性和氫鍵作用,還有一些二級作用,比如:離子交換、金屬螯合作用等。我們來分析下反相色譜柱的表征參數(shù):
一、USP數(shù)據(jù)庫
1.疏水作用(Hy):通過相同流動相體系,在不同的反相色譜柱對進行乙基苯測試,考察乙基苯的保留因子,保留因子越大,柱的疏水作用越強。
2.立體選擇性(TFA):通過相同流動相體系,在不同的反相色譜柱對進行測試,考察的拖尾因子,由于特殊的立體結(jié)構(gòu),拖尾因子越小,色譜柱的立體選擇性越強,同時硅醇基作用較弱。
3.金屬雜質(zhì)含量(CTF):色譜柱中會殘留少量的金屬離子,一般金屬離子會與喹啉結(jié)構(gòu)發(fā)生螯合作用,導(dǎo)致峰拖尾,故喹啉拖尾因子越大,柱金屬雜質(zhì)含量越大。
4.氫鍵作用(CFA):是堿性化合物,在酸性或中性條件下呈離子態(tài),保留因子較小,保留主要依靠氫鍵作用,保留因子越大,柱氫鍵作用越強。
二、PQRI數(shù)據(jù)庫
1.疏水作用(H):通過相同流動相體系,在不同的反相色譜柱對進行戊基苯和丁基苯測試,考察乙戊基苯和丁基苯的保留因子之比,比值越大,柱對不同碳鏈長度化合物的選擇性越強,疏水作用越強。
2.立體選擇(S):區(qū)分平面結(jié)構(gòu)(三苯乙烯)和空間體積較大的結(jié)構(gòu)(鄰三苯基)的能力。前者與后者保留因子之比體現(xiàn)空間選擇性,比值越大,立體選擇越強。
3.氫鍵作用(A或B):通過相同流動相體系,在不同的反相色譜柱測試C8H10N4O2和C6H5OH保留因子比值,數(shù)值越大,氫鍵作用越強。PQRI數(shù)據(jù)庫進一步將氫鍵能力描述為氫鍵酸度(A)、非電離硅烷與堿相互作用的能力和氫鍵堿度(B)、硅膠表面或鍵合相與酸性分析物的特性進一步相互作用的能力。
4.離子交換作用(pH2.7或7.0):在流動相pH2.7和7.0下,分別測試苯芐胺和保留因子之比,比值越大,說明色譜柱區(qū)分極性化合物的能力越強。
固定相類型:
A-A型硅膠,無定型硅膠,表面殘余大量硅醇基;
B-B型硅膠,球形高純硅膠,目前主流硅膠類型,硅醇基殘留少;
E-鍵合相含嵌入極性基團的固定相;
phenyl-聚苯乙烯聚合物固定相;
F-氟代固定相。
對比USP與PQRI的數(shù)據(jù)信息,PQRI數(shù)據(jù)庫的色譜柱參數(shù)更加全面反應(yīng)色譜柱的性能。